6.4.2 Клонирование в дрожжах

Среди дрожжей наиболее изучены S.serevisiae. Дрожжевая плазмида Scp1 содержит около 6300 пар оснований и имеет от 50 до 100 копий на клетку. Ее гибриды с плазмидами обычно используют в качестве векторов. Работа с дрожжами облегчается тем, что они могут расти в жидкой среде и давать колонии на твердой среде, имеют короткое время регенерации.

Процедура внедрения ДНК в клетки дрожжей достаточно проста. Целлюлозную стенку удаляют обработкой ферментами, получая сферопласты. Их инкубируют с ДНК в присутствии хлорида кальция и полиэтиленгликоля. Мембрана при этом становится проницаемой для ДНК. Дальнейшая инкубация сферопластов на твердой среде восстанавливает клеточную стенку. Последующая селекция заключается в выращивании клонов на среде, в которой отсутствует тот или иной компонент. При этом трансформаты легко отбираются. Применяя приемы, аналогичные использовавшимся при клонировании бактерий, удается достичь синтеза чужеродных белков в клетках дрожжей, например, интерферона человека.