Приготування вихідних ферментних розчинів

Для приготування основного розчину з поверхневої культури 5 г її зважують у хімічній склянці на 50 мл, переносять у конічну колбу на 250 мл, додають 90 мл дистильованої води і 10 мл ацетатного буферного розчину з рН 4.7. Суміш термостатують протягом 1 год при температурі 30°С при періодичному перемішуванні і фільтрують. Витяжку можна зберігати протягом 1 доби при температурі від мінус 4 до плюс 2°С.

Робочий розчин готують розведенням основного згідно табл. 2. У цьому досліді й надалі всі піпетки, які використовуються для розведення і дозування реагентів повинні містити ватні тампони (для запобігання потраплянню слідів слини, яка містить амілазу).

При приготуванні робочих розчинів глибинних культур їх міцелій відділяють фільтруванням. Від 1 до 5 мл фільтрату (залежно від передбачуваної активності) розводять дистильованою водою у мірній- колбі на 250 мл і використовують одержаний розчин для проведення ферментативної реакції.

Для приготування основного розчину технічного (неочищеного) ФП до наважки 1.00 г повітряно-сухого препарату додають 100 мл дистильованої води, настоюють протягом 1 год при періодичному перемішуванні і фільтрують одержану витяжку. Кількість витяжки, необхідна для приготування робочого розчину (об'ємом 200 мл), залежно від передбачуваної активності препарату, становить (у мл):

70-120 од./г......................... 10

120-250 од./г......................... 5

250-500 од./г......................... 2

Приготування розчинів очищених ФП. У хімічній склянці місткістю 25 мл на аналітичній вазі зважують 0.1 г очищеного повітряно-сухого ФП. Наважку ретельно розтирають скляною паличкою з невеликою кількістю води, кількісно переносять її у мірну колбу на 100 мл, доводять об'єм розчину дистильованою водою до мітки, перемішують і при небхідності фільтрують. Одержаний основний розчин ФП зберігають не довше, ніж 1 доби при температурі від – 4 ºС до + 2 ºС. Його кількість, необхідну для приготування робочого розчину визначають з табл.3.

Таблиця 2.