Біотехнологія отримання рибофлавіну (закінчення)

Відокремлення біомаси продуцента.

Клітини Eremothecium ashbyii відокремлюють фільтруванням У випадку, якщо культуральна рідина погано фільтрується внаслідок глибокого лізісу клітин продуцента, біомасу відокремлюють центифугуванням.

Визначення рН і амінного азоту у фільтраті культуральної рідини.

У фільтраті або фугаті культуральної рідини визначають рН потенціометрично та вміст амінного азоту мідним способом (див. дод.).

Отримані дані порівнюють з початковими значеннями рН і вмісту амінного азоту у культуральній рідині.

Мікробіологічний контроль процесу вирощування культури Eremothecium ashbyii.

За умови глибинного вирощування культури Eremothecium ashbyii показовим є контроль мікроскопіюванням процесу вирощування.

Для порівняння морфологічних ознак культури продуцента у різні періоди його розвитку відбирають проби культуральної рідини на другу та п’яту добу вирощування. Готують не зафарбовані препарати, розглядають їх під мікроскопом і відмічають морфологічні особливості культури (форму та розміри клітин, наявність спор, їх форму та розташування, утворення асків, тощо).

Особливу увагу слід звернути на вміст рибофлавіну в клітинах, жовті кристали якого добре видимі під мікроскопом. За нормального розвитку гриба Eremothecium ashbyii у початковий період росту (дводобова культура) основна маса вітаміну знаходиться у клітинах, у старій культурі (п’яти –шестидобова культура) клітини, в основному, вже не містять кристалів вітаміну, який вже майже повністю переходить у культуральну рідину.

Найпоказовішим є мікроскопіювання гриба Eremothecium ashbyii на різних стадіях розвитку в ультрафіолетовому світлі (люмінесцентна мікроскопія). Завдяки здатності рибофлавіну до флуоресценції розташування його кристалів чітко видно.

Визначити вміст рибофлавіну в культуральній рідині (методику див. вище). Узагальнити та проаналізувати отримані результати. Зробити висновик щодо впливу умов культивування на біосинтез рибофлавіну.

Контрольні запитання.

1. Які реакції дозволяють ідентифікувати вітамін А?

2. Принцип методу визначення вітаміну D?

3. Дайте характеристику промислового одержання каротиноїдів.

4. Які фактори впливають на процес екстракції вітамінів?

5. Які принципи лежать в основі методів визначення вмісту каротиноїдів у досліджуваних об’єктах?

6. Охарактеризуйте основні етапи одержання рибофлавіну.