Производство лечебно-профилактических сывороток и иммуноглобулинов

курсовая работа

Виды серологических иммунных реакций

Реакция агглютинации

Агглютинацией называется склеивание микробов (клеток) при действии на них специфических антител в присутствии электролита. Ее используют для:

1. определения вида и серовара выделенных бактерий (серотипаж);

2. обнаружения антител сыворотке крови больного (серодиагностика).

Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента:

1) антиген (агглютиноген);

2) антитело (агглютинин)

3) электролит (изотонический раствор натрия хлорида).

Рисунок 1 - Классификация и цели использования реакции агглютинации (РА)

В качестве антигена в РА используют суточную взвесь живых или убитых формалином, спиртом, нагреванием бактерий (диагностикумы). Обычно для приготовления бактериальных антигенов используют S-формы культур, которые в 0,5 % растворе натрия хлорида образуют равномерную взвесь. R-формы бактерий как антигены не пригодны, так как агглютинируются спонтанно.

Для получения агглютинирующих сывороток иммунизируют кроликов. При этом им 5--7 раз подкожно, а затем внутривенно с интервалами 2--7 суток в возрастающих дозах вводят убитые бактерии. Заканчивают курс иммунизации животных 2--3 инъекциями живых бактерий. Через неделю определяют титр сыворотки -- максимальное ее разведение, которое агглютинирует гомологичный микроорганизм. Если титр сыворотки недостаточен, иммунизацию продолжают.

Полученные таким путем агглютинирующие сыворотки называются неадсорбированными, поскольку содержат групповые агглютинины и могут в небольших разведениях склеивать родственные в антигенном отношении бактерии. Поэтому для определения вида бактерий надо ставить развернутую реакцию с сывороткой, разведенной от 1:100 до ее титра. Сыворотка соответствует микробу в том случае, если агглютинирует его как минимум до половины титра.

Более достоверные результаты при определении вида или серовара бактерий дают адсорбированные (монорецепторные или типоспецифические) сыворотки, которые не имеют групповых агглютининов, вследствие чего нет необходимости разводить их и реакцию агглютинации в них ставят на предметном стекле. Ориентировочная, или пластинчатая, РА ставится на предметном стекле при комнатной температуре. Для этого пастеровской пипеткой на стекло наносят раздельно каплю сыворотки в разведении 1:10--1:20 и контрольную каплю изотонического раствора натрия хлорида. В ту и другую бактериологической петлей вносят колонии или суточную культуру бактерий (каплю диагностикума) и тщательно перемешивают их. Реакции учитывают через несколько минут визуально, иногда с помощью лупы (х5). При положительной РА в капле с сывороткой отмечают появление крупных и мелких хлопьев, при отрицательной -- сыворотка остается равномерно мутной.

В некоторых случаях, когда, для агглютинации берется небольшое количество бактерий и учесть ориентировочную РА из-за этого трудно, капли сыворотки с внесенной в нее культурой высушивают, фиксируют, окрашивают фуксином Пфейффера и микроскопируют. При положительной реакции агглютинации в отдельных полях зрения микроскопа наблюдаются скопления бактерий, при отрицательной -- бактерии распределены в мазке равномерно. Эта реакция получила название микроагглютинации. Агглютинацию живых лептоспир наблюдают в темном поле зрения в раздавленной капле, где они, склеиваясь, обнаруживаются в виде искрящихся «паучков».

Делись добром ;)